背景近年，欧盟关于动物保护和用非动物源性抗体取代动物源性抗体的建议在科学界引起了极大反响，因而重组抗体迎来了高速发展和被广泛应用的黄金时期。

正如我们在《一起揭秘抗体背后的故事！（上篇）》《一起揭秘抗体背后的故事！（下篇）》中所提及的，在所有情况下，重组抗体都是单克隆抗体，无论其形式是完整的IgG还是较小的片段。

完整的IgG重组抗体的一个优点是它们是最类似于常规抗体的形式。

因此，其与二级抗体在使用、储存和相关特性检测方面，与常规抗体几乎无异。

此外，如果重组抗体来源于常规单克隆抗体，其效力和特异性与来源单克隆抗体相比，即使不完全相同，也是高度相似的。

并且重组抗体片段比完整的IgG抗体具有更多的优势，在生产的时候，可以重组产生多种形式的具有共组装H和L链的抗体片段，包括单价Fab（monovalent Fab）片段，或是单链抗体片段通过将V_H和V_L区域融合成单个多肽来产生，如单链抗体（scFv），亦或是通过产生仅H链骆驼抗体的小型化版本的抗体(nAbs)。

重组抗体让抗体有更多的改造可能。

与单克隆抗体和多克隆抗体相比，转化为重组形式为进一步生物工程以增强其特性创造了无限的机会，并且重组抗体在恶劣条件下具备常规抗体无法企及的稳定性。

如今，不同形式的重组抗体已应用于科研，医疗等多个领域。

 

重组抗体在肿瘤方面的应用

EphA2（Erythropoieti-producing hepatocellular A2）作为Eph受体家族的一员，EphA2广泛表达于人类上皮来源的各种组织或细胞系中，在正常条件下表达极低。

大量临床研究的证据表明，EphA2在多种上皮源性恶性肿瘤中高度表达，包括肝细胞癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、彩色直肠癌、胃癌、宫颈癌和皮肤黑色素瘤。

EphA2在多种恶性肿瘤中的表达模式、定位和功能的重要性使其成为一个有吸引力的治疗靶点。

来自西南科技大学的叶迎春团队，从200例不同肿瘤病人的PBMCs中提取mRNA，用于构建scFv抗体免疫文库，以筛选针对EphA2肿瘤靶点的scFv抗体。

此外，研究者们还构建了二价重组scFv-Fc和全长IgG1抗体。从肿瘤患者的免疫库中筛选的抗EphA2抗体保留了它们的生物活性和高抗原亲和力，发现重组的scFv-Fc和IgG1抗体可以抑制肿瘤生长。

这项研究为恶性肿瘤的后续抗体治疗提供了理论基础^[1]。

 重组抗体除了在肿瘤方面，在神经研究领域中也有广泛应用。

 

重组抗体在神经研究中的应用

scFv抗体已被广泛用于大脑的临床指导，包括作为生物疗法，并用于靶向非侵入性诊断成像模式（如PET）的探针。

最近很多的综述都深入介绍了脑中单链抗体的用途。

这些应用利用了scFv分子较小的特性，可以提供更好的组织渗透/生物利用度，包括穿过血脑屏障（BBB）。

针对脑靶点的单链抗体也可转化为双特异性抗体，其中重组IgG分子的两个“臂“被设计成具有不同的结合特异性，一只手臂靶向BBB受体，该受体通过受体介导的细胞转运更有效地到大脑中，而另一只手臂携带针对大脑治疗靶点的功能。

在基础神经科学研究中，单链抗体已用于多种目的，包括从先前产生的单克隆抗体衍生的单链抗体和从单链抗体库从头开发^[2]。

此外，重组抗体在食品检疫中也有所应用。

 

重组抗体在食品检疫中的应用

食品安全关乎每个人的身体健康，而污染食品的主要病原体包括细菌、病毒、寄生虫、真菌和朊病毒。

其中一些微生物，如细菌和真菌，会向食品中释放有毒化合物，这些化合物在食品加工过程中不易失活，也会导致食物中毒。

如何快速，灵敏的检测这些病原体是食品安全方面的热点问题。

导致食源性疾病的最常见细菌包括沙门氏菌属（Salmonella spp.）、弯曲杆菌属(Campylobacter spp.)、李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色*葡萄*球菌(Staphylococcus aureus)和双球菌大肠杆菌病型(diarrheicE. coli pathotypes)，隐孢子虫属(Cryptosporidium spp.)和环孢菌属(Cyclospora spp.)等寄生虫和病毒。

最广泛应用的微生物检测技术仍然涉及培养和显微镜检查，但它们非常耗时，需要熟练的个人和大量的工作。

现在已有一些替代方法，如PCR、基于免疫学或蛋白质组学的方法和生物传感器，以改进检测手段并缩短分析时间^[3]。

在过去十年中，细菌噬菌体作为细菌检测的识别元件受到了重要关注，基于重组抗体的检测才刚刚起步。

如南开大学胡耀中博士等人使用His标记的V_HH和生物素化的V_HH作为捕获和检测抗体，对用于分析牛奶中金黄色*葡萄*球菌的ELISA方法进行了优化。

这些抗体是从用灭活细菌免疫的羊驼产生的纳米抗体库中筛选出来的，该测定方法显示对金黄色*葡萄*球菌具有高选择性，牛奶中的LOD为1×10⁴ CFU/mL。

该方法在预富集步骤还允许在相同的检测限下使用夹心法检测牛奶中的肠炎沙门菌，其中多克隆抗沙门氏菌抗体作为捕获剂，经选择的V_HH片段作为检测抗体^[4]。

现目前大部分的检测方法都是通过抗体库筛选后，结合ELISA技术进行相应的检测，在后续的发展中，还可使用荧光或化学/生物发光检测提高这些分析的检测限，并且它们可以很容易地应用于生物传感器的开发。

 

Sortase改造重组抗体

Sortase家族是在革兰氏阳性细菌中发现的一个转肽酶家族，它们是细胞外的膜相关酶，将表面蛋白共价连接到细菌细胞壁，这种“转肽酶”活性涉及识别目标蛋白的信号序列，在该序列内切割肽键，并将新产生的C端羧基连接到sortase活性位点内半胱氨酸的巯基。

该硫酯酰基酶中间体随后通过第二底物的胺基亲核攻击而裂解，后者最终通过酰胺键连接到目标蛋白。

通常，第二底物由细胞壁的肽交叉桥提供。

Sortase的转肽酶活性现广泛用于生物技术应用中的共价蛋白质修饰。

为了满足生物工程上的需求，人们现在生产来自金黄色*葡萄*球菌（Staphy-lococcus aureus）的截短型的Sortase A（Srt A）用于蛋白工程，它识别五肽LPXTG（其中X代表任何氨基酸），并将其在苏氨酸和甘氨酸残基之间切割。

具有亲核N端氨基的oligoglycine被用作第二底物，从而通过肽键实现共价连接^[5]。

Active Motif 推出的Sortag-IT™ 系列标记试剂盒使用来自金黄色*葡萄*球菌Sortase A5突变株，该突变株的活性明显高于野生型Sortase，以提供更快、更有效的标记反应。

Sortase A5在苏氨酸和甘氨酸残基之间切割该序列，然后用任何聚甘氨酸（G）n标记替换末端甘氨酸。

Active Motif 的Sortag-IT™ 用于将HRP、生物素、荧光团和其他标签直接连接到活性基序的AbFlex‍^®重组抗体（rAb）上。

野生型和Sortase A5突变蛋白的活性均依赖于Ca²⁺，因此，Sortag- IT标记缓冲液和试剂的配方包含Ca²⁺。

此外，我们的AbFlex‍^®重组抗体是在HEPES缓冲液中提供的，该缓冲液不结合Ca²⁺，不会干扰Sortase A5酶活性。

 

总结

重组抗体最主要的优点之一是它更加适用于不同形式的生物工程。

通过改变二级抗体结合的特异性，或通过添加表位标签或其它短序列，用荧光有机分子、生物素、DNA条形码等直接位点特异性标记抗体，或通过加入荧光蛋白序列，可以进行多种修改，以便于各种应用场景的使用。

这些例子强调了重组抗体在不同领域的多种用途。

随着应用场景的不断扩展，重组抗体的可用性和实用性会继续提高。

且随着重组DNA技术等生物工程技术的进步，进一步降低了开发重组抗体的成本，重组抗体因而更加具有竞争力。

在未来，通过将这些功能强大、识别明确且可高度重复稳定生产的重组抗体应用于科研、生产生活的不同环境，将有更多机会使其取得进一步的发展，并开辟新的研究应用领域。

而关于抗体，Active Motif可提供超过900多种高品质抗体：

 

Active Motif 抗体

• 经过验证的单克隆、多克隆抗体和AbFlex^®重组抗体

• 抗体种类丰富：

  -组蛋白

  -Polycomb/Trithorax

  -DNA甲基化

  -染色质相关蛋白/酶

  -RNA修饰及加工

  -转录因子

  -核受体

• 应用广泛：

  -ChIP、ChIP-Seq

  -Western Blot

  -免疫荧光

  -免疫细胞化学

  -Dot Blot

  -免疫沉淀

  -免疫组织化学

  -ELISA

  -CUT&Tag、CUT&RUN

  ……

  详细抗体产品列表欢迎访问： https://www.activemotif.com.cn/catalog/556/antibodies?svs_product_class=Antibodies

 

 

参考文献[1] Yang Y Q, Nian S J, Li L, et al. Fully human recombinant antibodies against EphA2 from a multi-tumor patient immune library suitable for tumor-targeted therapy[J]. Bioengineered, 2021, 12(2):10379-10400.[2] Trimmer J S. Recombinant Antibodies in Basic Neuroscience Research[J]. Current Protocols in Neuroscience, 2020, 94(1).[3] Peltomaa R, Barderas R, Benito-Pea E, et al. Recombinant antibodies and their use for food immunoanalysis[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2021.[4] Hu Y Z, Sun Y, Gu J X, et al. Selection of specific nanobodies to develop an immuno-assay detecting Staphylococcus aureus in milk[J]. Food Chemistry, 2021, 353.[5] Sina M, Christoph M, Simone G, et al. In vitro Sortagging of an Antibody Fab Fragment: Overcoming Unproductive Reactions of Sortase with Water and Lysine Side Chains[J]. ChemBioChem, 2011, 12:1774-1780.
 

如果您有任何疑问，

欢迎联系021-20926090，

18521362870。